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Tipo do documento: Dissertação
Título: Caracterização molecular de isolados clínicos de enterobacter spp. produtores de carbapenemases: determinantes de resistência aos carbapanêmicos e virulência, perfil plasmidial e tipagem molecular
Autor: Andrade, Letícia Kellen de 
Primeiro orientador: Nogueira, Mara Corrêa Lelles
Primeiro membro da banca: Andrade, Leonardo Neves de
Segundo membro da banca: Caldas, Heloisa Cristina
Resumo: O gênero Enterobacter spp. é um dos mais importantes entre a família Enterobacteriaceae; causa infecção nosocomial em diversos sítios corporais, cujo tratamento é um desafio, visto a resistência intrínseca e adquirida. É crescente os casos de Enterobacter spp. resistente aos carbapenêmicos, por meio da ação de enzimas chamadas de carbapenemases, associadas a elementos genéticos móveis e disseminadas por plasmídeos. Além do impacto da resistência aos antibióticos na saúde global, isolados de Enterobacter spp. ainda podem apresentar fatores de virulência, favorecendo o processo infeccioso. Objetivos: Os objetivos deste estudo foram investigar a diversidade de genes responsáveis pela produção de carbapenemases e genes de virulência; caracterizar os plasmídeos carreadores de genes carbapenemases e determinar o perfil de similaridade genética entre isolados de Enterobacter spp. de pacientes admitidos no Hospital de Base de São José do Rio Preto, SP. Material e Métodos: Foi feita a extração de DNA, investigação de genes de resistência aos carbapenêmicos e genes de virulência, caracterização dos plasmídeos carreadores de carbapenemases quanto ao grupo de incompatibilidade e tamanho e tipagem molecular por PFGE-XbaI. Resultados: O gene blaKPC-2 foi o determinante de resistência aos carbapenêmicos em 56 (98,2%) isolados do complexo E. cloacae e 11 (100%) E. aerogenes e blaNDM-1 em um (1,8%) isolado do complexo E. cloacae. Dentre os genes de virulência detectados nos isolados do complexo E. cloacae, entB foi detectado em 92,9%, iroN (40,3%), irp2 (7%) e mrkD (6,9%). Nos isolados E. aerogenes foi detectado entB (100%), irp2 (72,7%), iroN (54,5%) e fimH (27,7%). Foi estimado o tamanho dos plasmídeos carreadores dos genes blaKPC-2 em 96,5% dos isolados do complexo E. cloacae e 100% dos E. aerogenes, apresentaram tamanho entre 15 e 210 Kb, sendo 60 a 70 Kb os tamanhos frequentes. A carbapenemase NDM é carreada por um plasmídeo de aproximadamente 150 Kb. Foi determinado o grupo de incompatibilidade dos plasmídeos carreadores de blaKPC-2 em 84% dos isolados do complexo E. cloacae e 100% dos E. aerogenes, os Inc identificados foram IncN, IncN2, IncM e IncA/C. A tipagem molecular revelou uma ampla diversidade de pulso tipos entre os isolados do complexo E. cloacae (46 clusters e gerou 8 clusters denominados A, B, C, D, E, F, G e H com mais de um isolado) e E. aerogenes (9 clusters, sendo um deles formando por mais de um isolado). Conclusão: As análises mostraram que o gene blaKPC-2 é o principal responsável pela resistência aos carbapenêmicos nos isolados estudados. Genes associados à captura de ferro são os principais determinantes de virulência. Plasmídeos IncM e IncN são os principais carreadores do gene blaKPC-2. Isolados geneticamente não relacionados estão associados às infecções nos pacientes estudados, mas a identificação de clusters evidencia a ocorrência de transmissão cruzada.
Abstract: The genus Enterobacter spp. is one of the most important among Enterobacteriaceae family causing nosocomial infection in several clinical site, since its intrinsic and acquired resistance, the treatment is a challenge. It is growing the cases of carbapenem-resistant Enterobacter spp., through the action of enzymes called carbapenemases, associated with mobile genetic elements and disseminated by plasmids. Beyond the impact of antibiotic resistance in global health, Enterobacter spp. isolates can still present virulence factors, favoring the infectious process. Objectives: The aims of this study were to access the diversity of resistance genes responsible for production of carbapenemases and virulence genes; characterize carbapenemase-carriyng plasmids and determine the profile of genetic similarity among Enterobacter spp. isolated from patients admitted at Hospital de Base of São José do Rio Preto, SP. Material and Methods: DNA was extracted, carbapenem resistance genes and virulence genes were investigated, plasmids carbapenemase-carrying was characterized in terms of incompatibility group and size and molecular typing by PFGE-XbaI. Results: The blaKPC-2 gene was the determinant of resistance to carbapenems in 56 (98.2%) isolates of E. cloacae complex and 11 (100%) E. aerogenes and blaNDM-1 in one (1.8%) isolate of E. cloacae complex. Among virulence genes detected in isolates of the E. cloacae complex, entB was detected in 92.9%, iroN (40.3%), irp2 (7%) and mrkD (6.9%). In E. aerogenes isolates, entB (100%), irp2 (72.7%), iroN (54.5%) and fimH (27.7%) were detected. The size of the plasmids carrying the blaKPC-2 genes was estimated in 96.5% of the isolates of the E. cloacae complex and 100% of the E. aerogenes, ranging in size from 15 to 210 Kb, with 60 to 70 Kb being the common sizes. NDM carbapenemase is carried by an approximately 150 Kb plasmid. The incompatibility group of the blaKPC-2 carrier plasmids was determined in 84% of the E. cloacae complex isolates and 100% of the E. aerogenes, the Inc identified were IncN, IncN2, IncM and IncA/C. Molecular typing revealed a wide diversity of pulsotypes between isolates of the E. cloacae complex (46 clusters and generated 8 clusters called A, B, C, D, E, F, G and H with more than one isolate) and E. aerogenes (9 clusters, one being formed by more than one isolate). Conclusion: The analyzes showed that the blaKPC-2 gene is the main responsible for the resistance to carbapenems among isolates studied. Genes associated with iron capture are the main determinants of virulence; IncM and IncN plasmids are the main carriers of the blaKPC-2 gene. Genetically unrelated isolates are associated with infections in the patients studied, but the identification of clusters highlights the occurrence of cross-transmission.
Palavras-chave: Enterobacter
Enterobacter
Enterobacteriáceas Resistentes a Carbapenêmicos
Carbapenem-Resistant Enterobacteriaceae
Tipagem Molecular
Molecular Typing
Área(s) do CNPq: CIENCIAS DA SAUDE
Idioma: por
País: Brasil
Instituição: Faculdade de Medicina de São José do Rio Preto
Sigla da instituição: FAMERP
Departamento: Faculdade 1::Departamento 1
Programa: Programa de Pós-Graduação em Ciências da Saúde
Citação: Andrade, Letícia Kellen de. Caracterização molecular de isolados clínicos de enterobacter spp. produtores de carbapenemases: determinantes de resistência aos carbapanêmicos e virulência, perfil plasmidial e tipagem molecular. 2020. 111 f. Dissertação (Programa de Pós-Graduação em Ciências da Saúde) - Faculdade de Medicina de São José do Rio Preto, São José do Rio Preto.
Tipo de acesso: Acesso Aberto
Identificador do documento: 1554
URI: http://bdtd.famerp.br/handle/tede/676
Data de defesa: 18-Nov-2020
Aparece nas coleções:Programa de Pós-Graduação em Ciências da Saúde
Programa de Pós-Graduação em Ciências da Saúde

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