@PHDTHESIS{ 2017:645252754, title = {Expressão dos genes VEGFA e NFE2L2 e regulação por microRNAs em câncer papilífero de tireoide}, year = {2017}, doi = "1335", url = "http://bdtd.famerp.br/handle/tede/500", abstract = "O bócio coloide e o câncer papilífero de tireoide são as alterações mais comuns da glândula tireoide. A angiogênese e o estresse oxidativo desempenham papéis fundamentais na progressão do câncer, com destaque para os genes VEGFA e NFE2L2, envolvidos nesses processos. A expressão gênica pode ser regulada por microRNAs (miRNAs, miR), uma classe de reguladores gênicos que controla processos celulares como o crescimento celular, diferenciação, proliferação e apoptose. Hsa-miR-17-5p e hsa-miR-612 são possíveis reguladores dos genes VEGFA e NFE2L2 e podem participar dos processos que resultam em alteração celular na tireoide e desenvolvimento de distúrbios como o bócio coloide e o câncer papilífero. Objetivos: Avaliar a expressão gênica e proteica de VEGFA e NFE2L2 e expressão dos miRs hsa-miR-17-5p e hsa-miR-612 em amostras humanas de câncer papilífero de tireoide, bócio coloide e tecido normal de tireoide. Além disso, investigar o envolvimento dos miRs hsa-miR-17-5p e hsa-miR-612 na regulação dos genes VEGFA e NFE2L2 em linhagem celular de câncer papilífero de tireoide (linhagem TPC-1). Materiais e Métodos: Foram incluídas no estudo 15 amostras de câncer papilífero de tireoide, 15 de bócio coloide e seus respectivos tecidos adjacentes, e seis amostras de tecido normal de tireoide. As quantificações dos genes e dos miRs foi realizada por meio da técnica de PCR em tempo real quantitativa (PCRq). A quantificação da proteína VEGFA foi realizada utilizando o ensaio imunoenzimático (ELISA), e a expressão da proteína NFE2L2 foi quantificada pela técnica de imuno-histoquímica. Para avaliar a regulação gênica pelos miRs, a linhagem celular TPC-1 foi transfectada com o inibidor do miR-17-5p e o mimetizador do miR-612 e a expressão dos genes VEGFA e NFE2L2 foi quantificada por PCRq. Resultados: O gene VEGFA apresentou alta expressão no tumor e seu tecido adjacente (P=0,0125 e P=0,0023, respectivamente) no bócio e tecido adjacente (P < 0,0001 para ambos os tecidos) em comparação ao tecido normal, assim como o gene NFE2L2 (tumor: P=0,0061 e adjacente: P=0,0149; bócio: P=0,0009 e adjacente: P<0,0001). A expressão gênica de VEGFA foi mais elevada no bócio em relação ao tumor (P<0.0001) e aos respectivos tecidos adjacentes (P<0,0001). Hsa-miR-612 apresentou expressão reduzida no tecido adjacente do tumor (P=0,016), no bócio e tecido adjacente ao bócio (P=0,015; P=0,0131, respectivamente). Hsa-miR-17-5p apresentou expressão reduzida apenas no bócio e seu tecido adjacente (P<0,0001; P=0,0448, respectivamente). Hsa-miR-17-5p foi mais expresso no tumor em relação ao bócio (P=0,033). Correlação negativa foi observada entre a expressão do hsa-miR-612 e a expressão de VEGFA e NFE2L2 no tumor (P=0,038; P=0,007) e no bócio com NFE2L2 (P=0.002). A expressão do miR-17-5p foi negativamente correlacionada à do gene NFE2L2 no tumor (p=0.019). A quantificação proteica do VEGFA mostrou que no câncer papilífero, no tecido adjacente ao tumor e no bócio coloide (P=0,0009; P=0,0138; P=0,0397, respectivamente) houve aumento em relação ao tecido normal. O tumor apresentou expressão mais elevada da proteína VEGFA em relação ao bócio e seu tecido adjacente (P=0,022; P=0,0003). A análise de quantificação da proteína Nrf2 mostrou que no citoplasma do tumor sua expressão foi mais elevada em relação ao bócio (P<0,0001) e tecido normal (P<0,0001). O tumor também apresentou no núcleo aumento da expressão de Nrf2 em relação ao bócio (P<0,0001). A transfecção do inibidor do miR-17-5p na linhagem celular TPC-1 resultou em inibição da expressão do gene NFE2L2 em aproximadamente 73%. Conclusão: Os genes NFE2L2 e VEGFA e seus produtos proteicos são amplamente expressos no câncer papilífero de tireoide e bócio coloide. Hsa-miR-612 apresentou expressão diferencial no tumor de tireoide e bócio coloide e hsa-miR-17-5p apresentou expressão diferencial somente no bócio. Hsa-miR-17-5p regula positivamente a expressão do gene NFE2L2 em câncer papilífero de tireóide. Hsa-mir-612 não participa da regulação da expressão dos genes VEGFA e NFE2L2 nesse tipo tumoral.", publisher = {Faculdade de Medicina de São José do Rio Preto}, scholl = {Programa de Pós-Graduação em Ciências da Saúde::-6954410853678806574::500}, note = {Faculdade 1::Departamento 1::306626487509624506::500} }